激光共聚焦顯微鏡與熒光顯微鏡在多個方面存在顯著的區(qū)別，這些區(qū)別主要體現(xiàn)在原理、特點、成像能力、應(yīng)用范圍以及技術(shù)細節(jié)上。以下是對兩者區(qū)別的詳細介紹：

一、原理不同

熒光顯微鏡：

原理：以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。

樣本制備：將需要觀察的細胞或組織制備成玻片或涂片，并使用熒光染料或熒光探針標(biāo)記樣本中的目標(biāo)分子或顆粒。

激發(fā)光照射：通過特定的激發(fā)光源照射樣本，使樣本中的熒光染料或熒光探針發(fā)出熒光。

熒光收集：在顯微鏡下觀察樣本時，通過物鏡和目鏡收集熒光信號，*終在目鏡中呈現(xiàn)出明亮的圖像。

激光共聚焦顯微鏡：

原理：在熒光顯微鏡成象的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置，使用紫外光或可見光激發(fā)熒光探針。激光束經(jīng)照明針孔，經(jīng)由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上，對標(biāo)本焦平面上每一點進行掃描。組織樣品中如果有可被激發(fā)的熒光物質(zhì)，受到激發(fā)后發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡，通過探測針孔時先聚焦，聚焦后的光被光電倍增管（PMT）探測收集，并將信號輸送到計算機，處理后在計算機顯示器上顯示圖像。

關(guān)鍵點：照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點同時聚焦于照明針孔與探測針孔，焦平面以外的點不會在探測針孔處成像，即共聚焦。

二、特點不同

熒光顯微鏡：

高分辨率：利用光學(xué)原理，可以獲得高分辨率的圖像，能夠清晰地顯示出細胞內(nèi)微小的結(jié)構(gòu)和分子。

靈敏度高：可以檢測到非常微量的熒光信號，適用于研究細胞內(nèi)分子和顆粒的運動和定位。

多色觀察：通過使用不同顏色的熒光染料或探針，實現(xiàn)多色觀察，有助于區(qū)分不同的細胞或組織類型。

激光共聚焦顯微鏡：

強大的成像能力：利用計算機進行圖像處理，得到細胞或組織內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖像，觀察細胞的形態(tài)變化或生理功能的改變。

多重染色優(yōu)勢：在多重染色時，各染料之間的cross-talk較少，且可使用Cy5等染料，擴大了觀察范圍。

Z軸上的分解能高：可了解組織的3D結(jié)構(gòu)，觀察被染上熒光的物質(zhì)在細胞里的分布，即使組織標(biāo)本較厚，也可獲得鮮明的畫像。

動態(tài)觀察：能夠動態(tài)觀察活細胞，是多重免疫熒光標(biāo)記和離子熒光標(biāo)記的有力工具。

三、應(yīng)用范圍不同

熒光顯微鏡：

廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域。例如，在生物學(xué)研究中用于觀察細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、基因和細胞器等結(jié)構(gòu)和功能；在醫(yī)學(xué)診斷中用于觀察組織樣本中的熒光信號以診斷疾病。

激光共聚焦顯微鏡：

由于其獨特的成像能力和技術(shù)優(yōu)勢，激光共聚焦顯微鏡在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料科學(xué)以及納米技術(shù)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。它特別適用于需要高分辨率、高靈敏度和多色觀察的研究場景。

四、技術(shù)細節(jié)差異

極限分辨率：激光共聚焦顯微鏡的極限分辨率通常高于傳統(tǒng)熒光顯微鏡，這得益于其更先進的成像技術(shù)和更高的光學(xué)性能。

掃描驅(qū)動方式：激光共聚焦顯微鏡采用激光轉(zhuǎn)鏡控制激光掃描范圍和掃描速度，而傳統(tǒng)熒光顯微鏡則沒有這樣的掃描機制。

工作環(huán)境：兩者通常都可以在大氣環(huán)境中進行測試和觀察，但某些G端或特殊用途的顯微鏡可能需要特定的環(huán)境條件。

綜上所述，激光共聚焦顯微鏡與熒光顯微鏡在原理、特點、成像能力、應(yīng)用范圍以及技術(shù)細節(jié)等方面都存在顯著的差異。這些差異使得兩者在科學(xué)研究和實際應(yīng)用中具有不同的優(yōu)勢和局限性。